荧光定量PCR法检测儿童肺炎支原体感染的

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【摘 要 】 目的探讨呼吸道感染患儿肺炎支原体的感染情况. 方法荧光定量PCR法. 结果肺炎支原体的总检出率为29.1%,30 d~1岁组,1~3岁组、>3岁组的患儿肺炎支原体感染率明显高于<30 d组,差异有统计学意义.四季差异无统计学意义.男女阳性率比较差异无统计学意义.血液和痰标本阳性率比较差异有统计学意义. 结论肺炎支原体感染随着年龄增长感染率逐步升高.痰标本检出的阳性率明显高于血液标本.

【关 键 词 】肺炎支原体;呼吸道感染;荧光定量PCR法

肺炎支原体(M.pneumoniae)是儿童和青少年呼吸道感染最常见的病因之一,由它引起的肺炎称为肺炎支原体肺炎,也称作原发性非典型肺炎.本病是儿科常见病,多发病.笔者应用荧光定量PCR(Fluorogenic Quantitative PCR,FQ-PCR)法对560例呼吸道感染患儿进行了肺炎支原体检测,结果报告如下.

1.对象和方法

1.1 对象 河南省信阳职业技术学院附属医院2006年12月至2007年11月儿科住院的呼吸道感染患者,共560例.其中,男340例,女220例.年龄:分为4组,<30d 340例,30 d~1岁46例,1~3岁63例,>3岁111例.发病季节:春季(3~5月)126例,夏季(6~8月)64例,秋季(9~11月)133例,冬季(12~2月)237例.所有检测对象检测前3 d均未用抗生素治疗.


1.2 标本采集 血液标本60例:抽取1 ml静脉血于含有EDTA抗凝剂的无菌试管中,混匀送检.痰标本500例:吸痰器吸取1~3 ml呼吸道声门以下部位分泌物,置于内含2~4 ml生理盐水的无菌专用管中,立即送检.

1.3 仪器与试剂 仪器为中山大学达安基因股份有限公司的全自动荧光定量PCR分析仪.肺炎支原体PCR荧光检测试剂也由中山大学达安基因股份有限公司提供.

1.4 检测 严格按照试剂说明书要求的操作规程上机检测.

1.5 统计学方法 组间阳性率比较采用 χ2 检验.

2.结果

2.1 肺炎支原体(MP)荧光定量PCR检测结果 560例儿童患者中,MP检测阳性163例,总检出率为29.1%.其中,340例男患者中阳性101例,阳性率为29.7%.220例女患者中阳性63例,阳性率为28.6%.男女阳性率比较, P >0.05,差异无统计学意义.

2.2 不同年龄组MP感染的阳性率 见表1.

2.3 不同类型标本MP检测的阳性率 见表2.

2.4 不同季节MP感染的阳性率比较 见表3.

3.讨论

MP感染广泛存在,每3~4年流行1次,支原体肺炎平均占住院肺炎的10%~20%,流行期可占30%[1].本文的MP感染阳性率为29.1%(表1),提醒临床医生在诊断儿童呼吸道感染时应检测MP.另据文献,支原体肺炎主要经飞沫感染,大多发生于夏末秋初,但一年中任何时间都可发生[2].与本文表3的检测结果基本一致,虽然各季节MP感染阳性率比较差异无统计学意义,但秋季和夏季的阳性率略高分别为33.1%和31.3%.从年龄来看,MP随着年龄的增长感染率也逐渐增高(表1),>3岁的患者,阳性率高达55.8%.<30 d患者感染率较低,可能与婴儿出生时从母体获得了抗体有关.血液和痰两种不同来源的标本,其阳性率具有显著性差异(表2),痰液的检出率高达30.8%,提示MP主要在呼吸道感染患儿的呼吸系统部位增殖.但也有部分侵入血液,引起支原体血症.FQ-PCR法是近年来发展起来的一项新技术,它融合了PCR技术与DNA探针技术,操作简便、快捷,结果准确.在完全封闭的状态下进行扩增和产物分离,克服了普通PCR检测易污染,不能定量,灵敏度不高等不足[3].方便了临床上应用,在疾病的基因诊断中有广阔的应用前景.肺炎支原体是儿童呼吸道感染最常见的病原体.严重危害儿童的身体健康,采用特异性、敏感性高的检测技术快速检测MP,可做到早诊断、早预防、早治疗.

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