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【摘 要 】 目的 建立测定复方五味子胶囊中五味子甲素含量的高效液相色谱法.方法 采用Kromasil C18(250 mm ×4．6 mm,5 μm)的色谱柱；以甲醇-0．1%冰醋酸水溶液(82∶18)为流动相；流速：1 ml/min；检测波长：254 nm；柱温为30℃.结果 五味子甲素在0．113 7~0．454 7 mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系(r＝0．999 2,n＝6),平均加样回收率为99．01%(RSD＝1．1%,n＝6).结论 HPLC法测定复方五味子胶囊中五味子甲素含量方法简便、准确、可靠.
【关 键 词 】高效液相色谱法；复方五味子胶囊；五味子甲素
Determination of Deoxyschizandrin in Compound Wuweizi Capsules by RP-HPLC
LI Hui,XIAO Jia-shang.6 Branch Institute for Drug Control of Guangzhou city,Guangzhou 510800,China
【Abstract】 Objective To set up a determination of deoxyschizandrin in pound wuweizi capsules by RP-HPLC.Methods Deoxyschizandrin could be separated through KromasilC18(250 mm×4．6 mm,5μm)column with methanol-0．1% acetic acid solution(82:18)by volume as a mobile phase.The flow rate was 1 ml/min and the detection welength was 254 nm,the temperature of column was 30℃.Results The linear range of deoxyschizandrin was 0．1137 mg/ml~0．4547 mg/ml(r＝0．999 2,n＝6)and the erage recovery was 99．01% with RSD 1．1%(n＝6)for deoxyschizandrin.Conclusion The method is simple,accurate and rapid with good reproducibility,it can be used for the quality control of pound wuweizi capsules.
【Key words】HPLC,Compound wuweizi capsules,Deoxyschizandrin
复方五味子胶囊是由五味子、红参、麦冬、远志、刺五加、甘草六种药材研制而成,具有安神益智、益气复脉、养阴生津的功效,临床上主要用于神经衰弱、心悸气短、气阴两亏、脉微自汗等症状.
五味子是方中君药,其中五味子甲素为重要有效成分.现代药理学表明[1],五味子甲素有明显的安定和抗惊厥等生理活性,且对大脑皮层的兴奋抑制过程有调节作用.为了有效地控制该制剂的质量,保证临床用药的疗效稳定、安全可靠,本文在参考文献的基础上[2],采用反相高效液相色谱法,以五味子甲素为指标,测定复方五味子胶囊中五味子甲素的含量.经方法学考察,本法灵敏度高,操作简便,结果准确,重复性好,可用于复方五味子胶囊的质量控制.
1.仪器与试药
WATERS2695/2996型高效液相色谱仪(美国)；自动进样器；Empower色谱工作站；复方五味子胶囊(广州天鑫药物科技开发公司提供,批号：070518、070620、070713)；五味子甲素(110764-200107)(中国药品生物制品检定所,供含量测定用).甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯.
2.方法与结果
2．1 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱：KromasilC18(250 mm×4．6 mm,5μm)；流动相：甲醇-0．1%冰醋酸水溶液(82∶18,)；流速：1 ml/min；检测波长：254 nm；柱温：30℃；进样量：10 μl.在此条件下,供试品中五味子甲素与其他组分峰能达到基线分离,分离度好,五味子甲素峰保留时间约为15 min,理论板数按五味子甲素峰计均不低于2500,分离度均大于1．5,见图1、图2、图3.
2．2 对照品溶液的制备 精密称取五味子甲素对照品28．42 mg,置50 ml量瓶中,加甲醇溶解,并稀释至刻度,得到0．568 4 mg/ml的五味子甲素对照品贮备液.精密吸取5 ml置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,得0．284 2 mg/ml的五味子甲素对照品溶液.
2．3 供试品溶液的制备 取装量差异项下供试品内容物,研细混匀,精密称定适量(约 2．5 g),加正己烷100 ml,加热回流提取4 h,放冷,摇匀,过滤.取滤液,蒸干,加甲醇溶解定容置25 ml容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液[3].
2．4 阴性对照供试液的制备 取处方比例药材(除五味子外),按复方五味子胶囊制备工艺制得复方五味子空白胶囊,再按“2．3”项下制备方法制得阴性对照供试溶液.
2．5 专属性试验 照上述色谱条件,取上述3种溶液,分别注入液相色谱仪,结果表明供试品色谱在与对照品色谱相应位置上,有一相同的色谱峰,而阴性对照供试液在此保留时间内不出峰,无干扰,可达基线分离,且分离度好,见图1、图2、图3.
2．6 线性关系考察 精密吸取五味子甲素对照品贮备液(0．568 4 mg/ml)1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、4．0 ml置5 ml容量瓶中,并加甲醇至刻度,分别取10 μl注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定五味子甲素色谱峰面积,以五味子甲素浓度为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,得回归方程为：y等于23147 62x-39．327(r等于0．999 2),线性范围：0．113 7~0．454 7 mg/ml.结果表明在此范围内五味子甲素进样浓度与峰面积呈良好的线性关系.
2．7 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10 μl,按上述色谱条件重复进样5次测定,以五味子甲素峰面积计算,其结果的RSD＝1．2%(n等于5),表明该方法的精密度良好.
2．8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10μl(批号：070518),分别在0、2、4、8、12、24 h进样测定,峰面积的RSD等于1．4%(n等于6),表明供试品溶液在24 h内测定基本稳定.
2．9 重复性试验 精密称取同一批供试品(批号：070620)6份,按“2．3”供试品溶液制备项下方法制备并测定, RSD等于1．3%(n等于6),结果表明此法重复性良好.
2．10 加样回收试验 精密称取已知含量的样品(批号：070713,五味子甲素含量为2．80 mg/g)6份,每份约2．5 g,按“2．3”供试品溶液制备项下操作.精密吸取上述供试品溶液各0．5 ml,分别精密加入五味子甲素对照品溶液(0．284 2 mg/ml)1 ml,混匀后,按上述色谱条件测定五味子甲素的含量,计算回收率.见表1.
2．11 样品测定 取样品3批,按“2．3”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进样测定.结果测得3批复方五味子胶囊中五味子甲素含量分别为2．79,2．84和2．80 mg/g,RSD分别为1．2%,1．1%和1．4%.
3.讨论
3．1 本实验对文献报道的五味子甲素提取溶剂和条件进行了考察,经HPLC验证,正己烷提取效果较三氯甲烷好,加热回流较超声好.故采用以正己烷为溶剂,加热回流提取.
3．2 流动相曾选用文献[4]报道的甲醇-水(73∶27)系统,发现复方五味子胶囊在该流动相系统下五味子甲素的峰与前后其他峰不能完全分开.最后经过多次比例试验,选择甲醇-水(82∶18)时,复方五味子胶囊-HPLC图谱中五味子甲素和其他峰能完全分离,当加入0．1%冰醋酸时峰形能得到明显改善.
3．3 据五味子甲素标准溶液的紫外扫描图谱显示,五味子甲素的最大吸收波长在254 nm,本实验选用254 nm吸收波长为测定波长,可排除干扰,且灵敏度能达到定量测定要求.