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论文摘 要 ：目的为充分利用芹菜食物资源,避免资源的浪费,探讨芹菜总黄酮的提取及鉴别方法.方法采用超声波乙醇浸提法从芹菜中提取黄酮类物质,对所提取的黄酮类物质进行验证,并用分光光度法测定含量.结果测得样品中总黄酮的含量C等于0.2126 mg/ml,回收率为100.3%,其纯度和产率均较高.结论该方法采用全物理过程,无任何污染,是提取芹菜黄酮类物质的有效途径.
主题词： 芹菜 提取 总黄酮
中图分类号：P746.2+2
芹菜Apium greolens L.属伞形花科一年生或二年生草本植物,异名药芹、旱芹.芹菜味辛、甘,性凉,营养丰富.已有研究证实,芹菜含有丰富的黄酮类化合物、多不饱和脂肪酸、矿物元素、丁基苯酞类、萜类、香豆素衍生物、叶绿素、氨基酸与维生素、膳食纤维等,其中,黄酮类化合物主要成分为水蓼素及7-水蓼素,医学证明,这2种黄酮类化合物是 治疗 高血压的有效成分.在药理上,芹菜还具有降压、安神、降血糖、血脂、软化血管、增强免疫力、增进食欲和健胃等药理作用.还可作为神经衰弱、小便热涩不利、月经不调等症的食疗.芹菜中含有大量膳食纤维素,经常食用有促进肠蠕动、防治便秘以及预防大肠癌等.
有文献报道芹菜中总黄酮的提取方法采用乙醇提取,但是,这种方法的提取效率仍然较低.近年来,超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道,表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点.很多研究表明,利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等,可加速植物材料中的有效成分进入溶剂,从而增加有效成分的提取率,缩短提取时间,并且还可避免高温对提取成分的影响.但超声技术应用于提取芹菜中黄酮类物质的研究尚未见报道,本文报道用超声波提取芹菜总黄酮及鉴别.
1.仪器与试剂
1.1 仪器
KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40kHz、昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I型三用紫外分析仪（上海顾村光电仪器厂）；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）.
1.2 试剂
95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（ 中国 药品生物制品检定所）；新鲜芹菜买自百色市农贸市场.
2.方法与结果
2.1 总黄酮成分提取
取新鲜芹菜,烘干,粉碎.称取芹菜粉末约6 g,加80 ml 95%乙醇,超声波提取2.5 h,抽滤.滤渣再加80 ml 95 %乙醇,超声波提取2.5 h,抽滤,合并两次滤液,减压回收乙醇至滤液仅剩5～7 ml为止,放置100 ml容量瓶中,用60%乙醇稀释至刻度,得样品液.
2.2 测定方法依据
以芦丁为对照品测定芹菜中总黄酮的含量,加入铝离子试剂,同时控制适宜pH值,使黄酮化合物与铝盐形成络合物,在可见光区能获得稳定的特征吸收峰.
2.3 定量实验-总黄酮的含量测定
2.3.1 波长的选择取样品液适量,在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下,经硝酸铝显色后,以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度,络合物于510 nm波长处有最大吸收,故测定时选用此波长.
2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.13 mg/ml）0.00,0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00 ml于10.00 ml容量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml,摇匀,静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml,摇匀,静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置12 min,以试剂作空白参比液,于510 nm处测定吸光度.
2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml,置10.00 ml容量瓶,按标准曲线的制备方法测定其吸光度A等于0.137,根据回归方程：A等于3.619×103+12.34C, 计算 样品中总黄酮的含量C等于0.216 2 mg/ml.
2.3.4 回收率实验
精密量取样品液1.00 ml,加入标准芦丁对照品1.00 ml（0.13 mg/ml）,同前样品测定方法操作测定吸光度,求出回收率为100.3% .
2.4 定性实验-总黄酮的鉴别
2.4.1 颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上,在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点.
浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上,将滤纸在氨水上方熏30 s,立即在紫外光下观察,呈极明显的黄褐色荧光斑点.
三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上,滴加1%三氯化铝乙醇溶液,吹干.在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈黄色荧光斑点.
乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上,滴加1%乙酸镁甲醇溶液,吹干,紫外光下呈黄色斑点.
盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉,再加入浓盐酸数滴（1次加入）,在泡沫处呈紫红色.
2.4.2 纸层析取样品溶液10 μl点在滤纸上.用正丁醇∶醋酸∶水等于4∶1∶5（体积比）为展开剂,上行展开5 h,取出晾干.喷1%氯化铝乙醇溶液.吹干后于紫外光下,可见荧光斑点.
3.讨论
3.1 实验结果表明,本实验方法工艺简单,回收率为100.3%,利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高.超声波可以强化乙醇浸提法,达到省时、高效、节能的目的,此方法采用全物理过程,无任何污染,是一条理想的提取黄酮类物质的途径,具有广阔的应用前景.
3.2 黄酮类化合物是一大类天然产物,广泛存在于植物界,是许多中草药的有效成分.在 自然 界中最常见的是黄酮和黄酮醇,其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等.天然来源的生物黄酮分子量小,能被人体迅速吸收,能通过血脑屏障,能进入脂肪组织,进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能.
黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、 治疗 骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用.近年来,世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐,而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目,芹菜分布广泛,本文实验结果表明,芹菜中含有黄酮.因此,芹菜具有广泛开发和利用价值,值得综合利用加强资源开发.