根癌农杆菌介导的‘魏可’葡萄遗传转化体系的优化

时间:2024-03-25 点赞:55358 浏览:117566 作者原创标记本站原创

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摘 要 : 以‘魏可’葡萄离体叶片为外植体,利用植物表达载体上含有卡那霉素抗性基因(nptⅡ)的根癌农杆菌LBA4404 (pCAMBIA2301)对影响‘魏可’葡萄遗传转化效率的因素进行系统研究.结果表明,最佳农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染4 min,共培养3 d,卡那霉素质量浓度5 mg·L-1,羧苄青霉素质量浓度200 mg·L-1.采用此体系对‘魏可’葡萄进行转化,共获得9株抗性苗.利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法检测,结果表明,有4株通过了PCR检测,1株通过了RT-PCR检测,初步证明nptⅡ基因已经整合进入‘魏可’葡萄基因组中.将PCR产物回收,经测序验证nptⅡ基因完全整合进入‘魏可’葡萄基因组中.对CK及经PCR检测呈阳性的株系进行卡那霉素抗性鉴定,发现PCR呈阳性的株系均比CK抗Kan的能力明显增强.



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