医学硕士生开题报告

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范文一

一、立题依据(科学意义及国内外现状分析及参考文献)

恶性黑色素瘤是一种高度恶性且最具侵袭性的癌之一,多发生于皮肤,早期发生血行转移.对放、化疗不敏感,在世界范围内发病率增高,人们一直在期待着可以征服恶性黑素瘤的新的疗法的出现！

最近大量的数据表明恶性肿瘤的发展与T-钙粘蛋白的表达变化相关.T-钙粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌[1-3]、胃癌、胰腺癌、卵巢癌[4-9]等多种恶性肿瘤中被检测到表达减少.最近的研究表明T/H&mdash,钙粘蛋白在乳腺癌中的重新表达能抑制肿瘤细胞的生长,降低体外培养的肿瘤细胞的侵袭潜能[1].T/H&mdash,钙粘蛋白这个新型钙粘蛋白分子在人类许多癌细胞中表达都降低表明它或许在肿瘤细胞的侵袭和转移[10]及维持正常细胞的表型中起重要作用[11].

T/H&mdash,钙粘蛋白与肿瘤的发生、发展有着密切的联系,也许它会为肿瘤的诊断和治疗带来新的契机.

T-钙粘蛋白是否对恶性黑色素瘤也有作用,目前还没有相关研究的报道,所以本实验将进行相关方面的探讨性研究！

二、研究内容及预期成果(说明具体研究内容、创新点及拟解决的关键问题、预期成果及提供形式)

研究内容：

第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T-cadherin表达情况

第二部分T-cadherin基因克隆和真核表达载体的构建

第三部分：T-cadherin基因的真核表达及生物活性分析

创新点：首次将T-cadherin基因转染黑素瘤细胞

拟解决的关键问题：通过RT-PCR反应扩增出T-cadherin的基因全长.

预期成果及提供形式：

观察T-钙粘蛋白在正常皮肤组织细胞、痣细胞及黑色素瘤细胞中的表达情况！

进一步阐明T-钙粘蛋白作用机制

T-钙粘蛋白基因转染入黑色素瘤细胞后观察对其增殖和转移活性的抑制情况,探索临床诊断和治疗黑色素瘤及其它肿瘤的方法！

三、研究方案(包括研究方法、技术路线、研究进度安排)

研究方法：

第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T-cadherin表达情况

免疫组织化学和免疫细胞化学

1.材料：从正常肤切取的痣组织,人黑色素瘤细胞株

2.主要试剂和溶液

(1)第一抗体：兔抗人T-cadherin抗体

(2)第二抗体：生物素标记羊抗兔IgG

(3)三抗：链亲和霉素标记HRP

3.设备

4.方法

(1)冷冻切片的免疫染色程序

(2)活细胞的免疫染色程序

5.荧光显微镜检

注意：为保证结果的可靠性应该同时设有对照

阳性对照(正常组织),

阴性对照(PBS代替一抗)以证明抗体的特异性.

第二部分T-cadherin基因克隆和真核表达载体的构建

1.材料：

(1)组织和细胞

(2)菌株与质粒

(3)工具酶

(4)试剂

(5)仪器

2.方法

(1)引物的设计

(2)总RNA的提取：异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提一步法

(3)甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析其质量,观察所提RNA有无明显降解,

(4)逆转录RT反应：为了证实RT反应的成功设管家基因GAPDH为内对照

(5)PCR扩增：利用上下游引物,在DNA聚合酶下对目的片段进行扩增,PCR过程设&beta,-actin为内对照

(6)PCR产物的回收、纯化

(7)PCR产物的克隆

(8)DNA序列测定

(9)真核重组表达质粒的构建

(10)阳性重组质粒的鉴定和筛选

(11)质粒的大量提取

(12)转染黑色素瘤细胞

第三部分：T-钙粘蛋白基因的真核表达及生物活性分析

1.材料

2.方法

(1)转染细胞的培养

(2)Western印迹法检测转染后蛋白的表达

(3)流式细胞周期分析

(4)凋亡的检测

技术路线图：

研究进度安排：

2004.9&mdash,&mdash,2005.7学习学位课程,查阅文献,完成课题设计

2005.9&mdash,&mdash,2006.9基本完成实验研究工作

2006.10&mdash,&mdash,2007.3完成实验补遗工作并进行统计分析,撰写论文

2007.4&mdash,&mdash,2007.6论文答辩

四、经费预算

试剂费用：15000元<,

BR>,组织及细胞：1000元

文献资料费：500元

论文打印费：1000元

答辩费：1500元

总计：19000元

五、课题可行性分析

实验在导师的指导下进行,导师段昕所教授、主任医师对黑色素瘤的诊断治疗、检测方法和研究进展有深入的了解,对本课题的研究设计及实验有重要的指导意义.

已完成黑色素瘤及T-钙粘蛋白研究最新进展的文献检索和综述报告工作.

所有实验均在承德医学院附属医院皮肤病研究室和中心实验室完成.实验室的老师实验技术熟练,在细胞培养、免疫组化及分子生物学等方面都可给予指导,实验所需的科研仪器设备实验室均具备.

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可:存在工作能力并具以上指标中三至四项.

差:丧失工作能力或生活不能自理,不考虑是否具备其他指标.

对上肢功能评价参照Seu和Hdlly对上肢功能评价标准[3]

观察指标为三项:疼痛、关节活动范围、日常活动能力.

l:上肢功能评价标准

分数痛疼任一关节活动受限日常活动

优

良

差无

用力或疲劳后

持续性<,°,

~4°,

>,4°,完全不受限

轻微受限

严重受限

5课题进度及安排：

9-5&mdash,&mdash,1-1收集病例及随访

1-1&mdash,&mdash,1-1资料汇总及数据分析

11-1&mdash,&mdash,11-3撰写论文、定稿

骨折不愈合应用自体骨移植治疗效果显著已经形成共识,治疗过程中的经验总结需要不断的进行,更要求开展回顾性工作及进行系统的整理.因此,骨折不愈合的临床资料分析就显得尤为重要.

本课题通过搜集整理山东中医药大学附属医院骨科9至1年期间的患者临床资料,对于自体骨移植治疗骨折不愈合的相关性问题进行临床研究与总结.应用统计分析评分进行术前、术后及相关方面比较,对自体骨移植治疗骨折不愈合的临床疗效获得客观、真实、准确的评价,并进一步指导临床工作.

山东中医药大学附属医院骨科是山东省中医管理局评定的重点学科、重点科室,在省内知名度较高,病人来源广泛.导师王明喜主任医师从事临床工作3余年,具有丰富的临床经验,对治疗骨折不愈合做过大量研究、临床工作,并取得了良好的效果.本课题搜集整理山东中医药大学附属医院骨科近几年的临床资料,并在导师指导下对这些一手资料进行研究与总结.

四肢长骨骨折不愈合由于并发症较多,治愈比较困难,手术后功能恢复过程漫长,因此在治疗过程中,经验的总结是非常必需的,也是可行的.本课题主要研究山东省中医院近年应用钢丝环扎36°,植骨配合LCP内固定治疗四肢长骨骨折不愈合的治疗效果分析情况,因此在选题上可行性较强.课题的研究也得到了学校、附院等各部门、科室的大力支持.相信可以圆满地完成课题.

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