大黄鱼类IV型抗冻蛋白基因的克隆、表达功能

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摘 要 :目的 研究大黄鱼类Ⅳ型抗冻蛋白基因编码产物的功能.方法从大黄鱼肝脏SSH eDNA文库筛选到的类似极地鱼类IV型抗冻蛋白的EST序列出发,用RACE方法克隆IV型抗冻蛋白基因全长eDNA,RT-PCR分析此基因在大黄鱼不同组织内的表达.构建原核表达载体pGEX-4T-Lycafp并表达蛋白质,亲和层析纯化GST融合蛋白,分析它的体外细菌抗冻保护作用.结果大黄鱼类Ⅳ型抗冻蛋白基因eDNA全长664bp,包含372 bp开放阅读框,编码124个氨基酸,经SignalP3.0软件预测其N端前20位氨基酸为信号肽,氨基酸序列与长角杜夫鱼lV型抗冻蛋白同源性高达52%;RT-PCR分析表明其mRNA仅在肝脏表达;重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,初步纯化后分析体外细菌抗冻保护作用表明,融合蛋白抗冻活性并不明显.结论大黄鱼类Iv型抗冻蛋白不具有显著的抗冻活性,这与大黄鱼不能在低温下生存吻合.


关 键 词 :鱼类IV型抗冻蛋白;RACE;抗冻活性;大黄鱼

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