盐酸左旋沙丁胺醇的有效成份测定

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论文摘 要 ：目的 测定盐酸左旋沙丁胺醇缓释胶囊的有关物质.方法 采用反相高效液相色谱法（RPHPLC法）,色谱柱为Kromasil C18柱 （250 mm×4.6 mm,5 μm）,以甲醇磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠9.77 g,加水溶解并稀释至1 000 mL,用磷酸调节pH值至3.10±0.05）（体积比20∶80）为流动相,检测波长为224 nm,流速1.0 mLmin-1.结果 各杂质峰分离良好,左旋沙丁胺醇的最低检测限为14 ng.结论 本法可用于盐酸左旋沙丁胺醇缓释胶囊中有关物质的检测.

主题词： 盐酸左旋沙丁胺醇 成份 检验

中图分类号：D918.93

手性药物左旋沙丁胺醇（levalbuterol,C13H21NO3）是一种β2肾上腺素受体激动剂,能刺激支气管平滑肌的β2肾上腺素受体,选择性松弛支气管平滑肌,具有支气管扩张作用,用于治疗哮喘、喘息性支气管炎、肺气肿患者的支气管痉挛.作为外消旋体沙丁胺醇的其中一个对映异构体,与消旋体比较,左旋沙丁胺醇去除了产生不良作用的右旋体后,其副作用减少,疗效也进一步提高.目前,国外已有左旋沙丁胺醇喷雾剂上市,我国尚未有左旋沙丁胺醇制剂上市,本文为对自制的盐酸左旋沙丁胺醇缓释胶囊进行质量控制,系统地考察了其有关物质的影响因素,并建立了该缓释胶囊有关物质的测定方法,该法操作简便,灵敏度高,结果准确.

一、仪器与试药

Ultimate3000高效液相色谱仪,PDA3000型检测器,CHROMELEON Version工作站（美国戴安）；KQ100型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BS224S型万分之一电子天平；CP225D型十万分之一电子天平（Sartorius）；盐酸左旋沙丁胺醇原料（苏州君宁新药开发中心有限公司,质量分数99. 8%）；盐酸左旋沙丁胺醇缓释胶囊（自制,批号080721、080722、080723,规格：4 mg/粒）；甲醇（色谱纯）；其他试剂均为分析纯.

二、方法与色谱条件

1.溶液配制

取本品20粒,研细,精密称取细粉（约相当于盐酸左旋沙丁胺醇20 mg）,置20 mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,即得供试品溶液.精密量取供试品溶液1 mL于100 mL量瓶中,加水稀释至刻度,即得对照品溶液.另取盐酸左旋沙丁胺醇原料药约20 mg,精密称定,置20 mL量瓶中,加水溶解并稀释到刻度,即得原料药对照溶液.取盐酸左旋沙丁胺醇空白微丸,研细,按处方比例称取适量（约相当于左旋沙丁胺醇20 mg）,置20 mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,即得阴性对照溶液.

2.色谱条件

色谱柱：采用Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相：甲醇磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠9.77 g,加水溶解并稀释至1 000 mL,用磷酸调节pH值至3.10±0.05）（体积比20∶80）；流速：1.0 mLmin-1,检测波长：224 nm.理论塔板数按盐酸左旋沙丁胺醇峰计算不低于3 000.

三、 结果

1.、专属性试验

取供试品溶液、原料药对照溶液和阴性对照溶液各3 mL,装入石英比色杯中,分别在254、365 nm的紫外灯下,将石英比色杯斜放成45°,并距灯管5～6 cm,照射10 min,取出.

另分别取约10 mg盐酸左旋沙丁胺醇原料、空白、样品各3份,分别置10 mL量瓶中,按以下条件进行破坏：①加0.01 molL-1 盐酸3 mL放置5 min,然后加入0.01 molL-1 氢氧化钠3 mL中和,再加水稀释至刻度；②加入0.01 molL-1 氢氧化钠3 mL放置5 min,然后加入0.01 molL-1 盐酸 3 mL中和,再加水稀释至刻度；③加入3%过氧化氢5 mL放置10 min,加水稀释至刻度.

取适量的空白、原料、样品细粉各1份,直接平铺在表面皿上,于90 ℃下放置2 h,取出,分别精密称取适量（约相当于左旋沙丁胺醇10 mg）于10 mL量瓶中,加水定容.

以上经破坏的溶液用0.45 μm的滤膜滤过,进样20 μL,依法进行HPLC分析,与未经破坏的原料药对照溶液和供试品溶液进样所得的色谱图进行比较,结果显示：空白辅料稳定,对测定没有干扰；样品经紫外、酸、碱、氧化、高温破坏后检测发现杂质量有所增加,各降解产物分离程度良好,见图1.

1.阴性对照； 2.原料药对照； 3.供试品； 4.氧化破坏样品； 5.酸破坏样品； 6.紫外破坏样品； 7.高温破坏样品；8.碱破坏样品；A-E.有关物质

2.、 检测限

取有关物质供试品溶液,逐级稀释,当溶液质量浓度为0.7 μgmL-1时进样20 μL,峰信号约为空白样品测出的噪音信号的3倍,故检测限为14 ng.

3. 供试品溶液的稳定性考察

取有关物质供试品溶液20 μL,分别于0、1、2、4、8 h测定,记录峰面积分别为4.071、4.206、4. 117、4.156、4.314,测得平均有关物质为0.80%,RSD等于1.76%,表明供试品溶液在8 h内稳定.

4.、 样品测定

取本品20粒（3批）,研细,按“2.1”项下的方法制得供试品溶液和对照品溶液.取对照品溶液20 μL注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使左旋沙丁胺醇的峰高为满量程的20%～30%；取供试品溶液20 μL注入液相色谱仪,记录色谱图至35 min,供试液的杂质峰的面积总和不大于有关物质对照溶液的主峰面积的1.5倍.测得3批样品有关物质的量分别为0.79%、0.79%和1.07%.

四、 讨论

1、 本法可检出5个分离度良好的有关物质,通过二级管阵列检测器进行光谱图分析发现,各杂质均与左旋沙丁胺醇有较相似的光谱图,且在224 nm附近均有最大吸收,故选择在224 nm波长处用自身对照法检测杂质的总量.

2 、 专属性试验显示：与原料药对比,经过制剂工艺后,样品新增杂质B,而杂质D有明显的增加；样品经酸、碱、氧化、高温和光照（紫外光）破坏后,杂质D均有明显增加；酸、碱处理对杂质B影响较大；样品经破坏试验,各杂质有不同程度的增加,但没有新增杂质.提示工艺过程中应关注杂质B、D的产生.制剂工艺研究中发现,适当降低包衣温度能有效控制杂质的限量.

3 、用正相高效液相色谱法测定盐酸左旋沙丁胺醇右旋体限度的同时进行有关物质的检查,由于左旋沙丁胺醇是水溶性药物,在非极性流动相的溶解性差,检测灵敏度较低,容易造成杂质漏检,本文采用反相高效液相色谱法专属性强,灵敏度高,可作为工艺筛选和成品质量控制的指标.