孕妇HBV—DNA定量对监测母体HBV传播价值

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【摘 要 】目的乙型病毒性肝炎是目前已确认的病毒性肝炎中对人类健康危害最为严重的一种肝炎.方法采用荧光定量PCR技术对122例乙肝血清标志阳性的孕妇及其婴儿血清进行HBV-DNA定量检测,分析母婴血清中含HBV-DNA的数量存在的相关性.结果在41例“大三阳”的孕妇组中,患者的血清中的HBV-DNA所含的数量在6.00-9.90之间,测的的平均值是7.57±1.27,母婴传播率为82.9%;“小三阳”组孕妇65例,血清HBV-DNA含量范围为<2.00-4.71,均值为413±1.64,母婴传播率为52.3%;在14例单一的HBcAb阳性的孕妇组中,患者的血清中含有的HBV-DNA的数量的范围小于2.00-4.71,测的平均值是3.17±1.54,母婴传播率为12.5%,HBV母婴宫内传播率随孕妇血清HBV-DNA含量的增高而增加.结论母婴乙型肝炎病毒宫内传播率与孕妇血清中HBV-DNA含量呈正相关性(r=0.351,p<0.01),当孕妇血清中HBV-DNA含量>6.00时,乙型肝炎病毒母婴宫内传播率显著增加(增加47.5%),提示有效控制患乙肝孕妇血清中HBV-DNA含量,可明显减少宫内母婴乙肝病毒传播率.

【关 键 词 】荧光定量PCR;HBV-DNA含量;乙型肝炎病毒;宫内传播

1资料与方法

1.1一般资料选择122名乙肝阳性的孕妇,经统计在122名患者中有41名大三阳患者即患者的血清中HbcAb阳性,HB-sAg阳性,HbeAg阳性;有65名患者是小三阳即患者的血清中HbcAb阳性,HbsAg阳性,HbeAg阳性;有16名患者是血清中只有HBcAb阳性.采血的时候要注意,在孕妇分娩之前采集孕妇的静脉血,在分娩的过程中采集胎儿的脐带血.采完血之后,用设备将血清进行分离,将分离后的血清放在零下20℃的环境中进行保存,留在以后用.选择合适的试剂.

1.2实验方法

1.2.1选择HBV-DNA定量的基本方法来进行实验.第一步先将获得的血清样本中的HBV-DNA通过PCR技术进行相应的不对称的扩增,在扩增的过程中会产生一条单链的DNA模板.第二步,在实验的血清中加入能够与该扩增的单链的DNA模板产生互补的荧光双链引物,然后再通过PCR技术进行巢式扩增,目的是能够使后来加入的荧光双链引物中的一条链与之前扩增的模板单链DNA重新进行碱基配对成为一条新的双链DNA分子,这样原来的荧光双链DNA引物的双链结构就遭到了破坏,其双链发生分离,就会阻断了原来的传递荧光能量的通道,再来通过专业的分析仪器来测定荧光信号的强度所发生的变化,这样就能够测得样品中的模板HBV-DNA含量是多少了.

1.2.2HBV-DNA进行定量测定的基本原理.选择AG-9600Am-plisensor的荧光定量PCR扩增系统,它的基本的原理就是能够通过测定荧光能量发生的转移来对DNA分子进行定量的分析.

1.2.3测定范围.

1.2.4将得到的结果用lg copies/ml来表示.

1.2.5将得到的数据进行统计分析.用χ±s来表示母婴的HBV-DNA的定量数据,用线性回归的方法对母婴间的相关性进行分析和检验,应用t检验来比较组间的均数,应用X检验的方法来对组与组之间的乙肝宫内传染率进行比较;用相关的统计软件来进行数据处理.

2对结果进行分析

2.1测的不同HBV血清学标志的孕妇血清中的HBV-DNA含量.在41名“大三阳”孕妇组中,患者的血清中所含的HBV-DNA数量在6.00-9.90之间,它的平均数是7.57±1.27;在65名“小三阳”孕妇组中,患者的血清中含有的HBV-DNA的数量量范围小于2.00-6.25,测的它的平均数是4.13±1.64;在16名单一的HBcAb阳性孕妇组中,测的孕妇血清中的含HBV-DNA的数量小于2.00-4.71,测得平均数是3.17±1.54.综合三者的结果可以得出结论,孕妇的血清中含有的HBV-DNA的数的量变化与孕妇的血清中HBV的血清学标志的变化是一致的.

2.2测定母婴HBV-DNA的相关性.在41名“大三阳”孕妇组中,患者的血清中测定的HBV-DNA的平均数是7.57±1.27,同时测得改组的婴儿的血清中含的HBV-DNA量的平均数是4.81±1.62;在65名“小三阳”孕妇组中,患者的血清中含有的HBV-DNA的量的平均数是4.13±1.64,同时测的改组的婴儿的血清中含有HBV-DNA量的平均数是3.01±1.30;在16名血清中单一的HBcAb阳性的孕妇组中,患者的血清中含有的HBV-DNA量的平均数是3.17±1.54,同时测得改组的婴儿的血清中含有的HBV-DNA量的平均数小于2.0.利用直线回归方法进行分析,可以知道母婴血清中HBV-DNA含量的测定值之间是正相关(r等于0.351,p<0.01)关系的,婴儿血清中的HBV-DNA的含量的测定值会随着其母亲体内血清中的HBV-DNA含量的测定值的增加相应增加(p<0.01).分析孕妇血清HBV-DNA测定数值是否与母婴之间HBV传播存在关系.在不同的组之间比较三组母婴血清中的HBV-DNA含量的测定值,并且记录测定的结果,见表1.


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