过硫酸氢钾复合物粉对口蹄疫病毒杀灭效果试验

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摘 要 ：以过硫酸氢钾复合物粉对口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus, FMDV）的杀灭效果进行了研究.将过硫酸氢钾复合物粉以不同比例稀释后对小白鼠、成年鼠、白兔分别进行皮射、灌服、斑贴试验进行消毒剂安全性试验,对病毒悬液进行了消毒剂灭活病毒效果试验.结果表明,过硫酸氢钾复合物粉1∶100倍及以上稀释对小白鼠、成年鼠及白兔安全；消毒剂100%杀灭口蹄疫病毒的最高稀释度为1∶1 200.过硫酸氢钾复合物粉对口蹄疫病毒有良好的杀灭效果.

关 键 词 ：口蹄疫病毒；过硫酸氢钾复合物粉；杀灭效果

中图分类号：S855.3 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）08-1877-03

口蹄疫（Foot and mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus,FMDV）所引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病[1].注射疫苗是控制口蹄疫的有效手段,但对畜舍的定期消毒及口蹄疫疫情发生后的消毒仍是重要的工作.强碱是一种对口蹄疫病毒有良好杀灭作用的消毒剂,但这种消毒剂对人和动物有较大的毒害作用,现在已经较少使用.随着消毒剂研制方法的改进,过硫酸氢钾复合物粉逐渐受到人们的关注[2].为观察验证其对口蹄疫病毒杀灭效果,本试验对过硫酸氢钾复合物粉的消毒作用进行了探讨,以期为有效控制口蹄疫提供理论支撑.

1.材料与方法

1.1 材料

过硫酸氢钾复合物粉（有效氯含量不低于10.0%,由甘肃临洮威特药业有限公司提供,文中简称消毒剂）.试验用病毒为O型口蹄疫乳鼠组织毒（LD50等于10-8.0）,由中国农业科学院兰州兽医研究所提供.试验用动物为4日龄小白鼠、成年鼠、2月龄新西兰白兔,由中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物场提供.

1.2 口蹄疫病毒悬液的制备

口蹄疫病毒悬液的制备按照参考文献[1、2]进行.将O型口蹄疫小白鼠组织毒（LD50等于10-8.0）用0.04 mol/L的磷酸盐缓冲液（pH 7.6）稀释成1∶10倍病毒悬液,备用.

1.3 消毒剂安全性试验

用灭菌水将消毒剂按质量体积比（m∶V,g/mL）稀释成（1∶50、1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1 000）后分别背部皮射4日龄小白鼠,每个浓度试验组注射5只,每只注射0.2 mL；设阴性对照组,每只小白鼠注射0.2 mL灭菌水.注射后连续观察7 d.2次重复.

用灭菌水将消毒剂按质量体积比（m∶V,g/mL）稀释成（1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1 000）后分别灌服成年鼠,每个浓度试验组灌服5只,每只灌服0.2 mL；阴性对照组,每只成年鼠灌服0.2 mL灭菌水.灌服后观察7 d,2次重复.

用灭菌水将消毒剂按质量体积比（m∶V,g/mL）稀释成（1∶100、1∶200、1∶400）,将5只白兔背部毛剪去,每个浓度试验组的消毒剂溶液1 mL均匀滴在白兔去毛皮肤表面；设阴性对照组,对照组白兔在去毛皮肤处滴1 mL灭菌水.观察7 d,2次重复.

1.4 消毒剂对口蹄疫病毒杀灭效果试验

根据安全性试验的结果,在安全浓度范围内将消毒剂做浓度梯度稀释（1∶800、1∶1 000、1∶1 200、1∶1 400、1∶1 600）后,与口蹄疫病毒悬液混匀,使病毒的终浓度达到1∶1 000,室温作用30 min后,皮射3日龄小白鼠.试验组每只小白鼠背部皮射0.2 mL；阳性对照组,每组注射0.2 mL的1∶1 000的病毒悬液；阴性对照组,每组注射0.2 mL的灭菌水.每组5只小白鼠,注射后观察7 d,重复2次.

1.5 结果判断

1.5.1 消毒剂的安全性判定 试验组小白鼠全部健活或无不良反应,判为安全,反之为不安全.

1.5.2 消毒剂对口蹄疫病毒杀灭效果的评价 阴性对照组小白鼠在观察期间无异常表现,全部健活,同时阳性对照组小白鼠在接种病毒后全部发病死亡,并从小白鼠体内检测到口蹄疫病毒,试验成立.在试验成立的情况下,试验组小白鼠在观察期间无异常表现,全部健活,判定该浓度下消毒剂有效；若试验组有小白鼠死亡,并从小白鼠体内检测到口蹄疫病毒,判定该浓度下消毒剂无效.

2.结果与分析

2.1 消毒剂的安全性试验结果

试验表明（表1、表2、表3）,过硫酸氢钾复合物粉1∶100倍及以上稀释对小白鼠、成年鼠及白兔安全,并且注射部位的皮肤无炎症.

2.2 对口蹄疫病毒杀灭效果

由表4可知,消毒剂100%杀灭口蹄疫病毒的最高稀释度为1∶1 200.

3.讨论

口蹄疫病毒属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属,其结构简单,由单股的核糖核酸和蛋白质组成[3].口蹄疫具有高度接触性和快速远距离传播的特点,因此加强环境消毒是防治口蹄疫的重要工作.

在传统的口蹄疫病毒消毒过程中使用强碱类消毒产品,这类消毒剂能快速杀灭口蹄疫病毒,但对人和动物的毒害作用较大.目前的口蹄疫防控多用新型、复合型消毒剂.过硫酸氢钾复合物粉是一种基于酸性氧化体系的新型过氧化物消毒剂,以过硫酸氢钾复合盐为主要成分,辅以氯化钠、表面活性剂等[4].近年来,过硫酸氢钾复合物粉作为一种广谱、高效、低毒的兽用复方消毒剂被广泛关注.过硫酸氢钾复合物粉是美国环保局（EPA）批准注册的第一个惟一用于预防口蹄疫的兽用消毒剂.美国农业部（USDA）已将其作为机场出入境消毒的常用消毒剂之一,来控制外来病原的入侵[5-7].该消毒剂具有很强的氧化系统,溶解后产生各种高能量、高活性的小分子自由基、活性氧等衍生物,通过链式反应系统破坏微生物细胞膜的通透性,干扰病原体的DNA和RNA合成,从而杀灭病原微生物[8].过硫酸氢钾复合物粉还具有强酸性（pH 2.2～2.6）,可以杀灭各种病原微生物,并不受有机物影响,其代谢产物不会对人、动物和环境带来影响.过硫酸氢钾复合物粉用于水体消毒时几乎不产生三氯甲烷等有毒产物；与含氯消毒剂相比,当pH≥6.5时杀菌效率高于氯系列消毒剂；与过氧化氢、过氧乙酸等消毒剂相比,性状稳定,易于保管储藏而且运输方便；可现场配制,溶解迅速,其对水质无严格要求.

试验研究表明,过硫酸氢钾复合物粉对口蹄疫病毒具有明显的杀灭作用,是一种安全、有效的非氯氧化型消毒剂,值得在口蹄疫防治中应用推广.