胃癌素PCNA基因蛋白的表达其相关性

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【摘 要 】目的：探讨胃癌组织中生存素基因蛋白表达与胃癌生物学行为及PCNA蛋白表达的相关性.方法：应用免疫组化SP法检测51例胃癌组织、47例非癌胃黏膜组织中生存素和 PCNA基因蛋白的表达.结果：生存素和PCNA蛋白在胃癌组织与非癌胃黏膜组织中表达的阳性率差异有显著性（P<0.05）.生存素蛋白表达与胃癌淋巴结转移、临床分期与浸润深度有关（P<0.05）,而PCNA蛋白表达与胃癌病理分级和淋巴结转移有关 （P<0.05）.生存素表达与PCNA表达呈正相关.结论：生存素和PCNA基因蛋白在胃癌的发生、发展中发挥重要作用,二者的检测对胃癌恶性度的判定、预后和进一步治疗提供有效的依据.

【关 键 词 】Survivin；PCNA；胃癌；免疫组织化学

文章编号：1009-5519（2008）05-0635-02 中图分类号：R73 文献标识码：A

Expression of survivin and PCNA in gastric carcinoma and their relationship

JI Chen-hua1,LIU Li-na2,LV Shen3,et al.

(1.Department of Emergency,Dalian Municipal Central Hospital,Liaoning 116033,China；2.The First Affiliated Hospital of Dalian Medical University,Liaoning 116011,China；3.The Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University,Liaoning116027,China）

【Abstract】Objective：To observe the relationship between survivin expression and the biological behior,as well as its correlation with the expression of PCNA in gastric carcinoma tissues.Methods：The expressions of survivin and PCNA were examined in 51 cases of the gastric carcinoma and 47 cases of peri-carcinoma tissues by immunohistochemical SP method．Results：The positive rates of survivin and PCNA in gastric carcinoma were significantly higher than that in peri-carcinoma tissues(P<0.05)．There was a significant relationship between survivin gene expression and lymph node metastases,TNM stages and the invasive depth of gastric carcinoma（P<0.05）．There was a significant relationship between PCNA gene expression and pathology differentiation and lymph node metastases of gastric carcinoma（P<0.05）．The expression of survivin was positively correlated with that of PCNA（P<0.05）.Conclusion：Survivin and PCNA may play certain roles in the oncogenesis and progression of gastric carcinoma．Detection of these gene products has positive effects on m alignancy determination,prognosis and treatment of gastric carcinoma．

【Key words】Survivin；COX-2；Gastric carcinoma；Immunohistochemistry

生存素是新近发现的凋亡抑制蛋白（IAPs）成员,近年来研究表明生存素与肿瘤的发生、发展密切相关.本研究通过免疫组化SP法检测生存素基因蛋白表达,探讨其与胃癌生物学行为及增殖细胞核抗原（PCNA）基因蛋白表达的相关性.

1.资料和方法

1.1 病例资料：胃癌标本均来自大连医科大学第一临床学院2005年10月~2006年8月经胃镜检查诊断并经病理检查证实的胃癌病人.标本经10%中性固定,常规石蜡包埋,4 μm厚连续切片,分别作HE和免疫组化染色.51例胃癌组织,男38例,女13例,平均（64.07±2.56）岁,按病理分级属高中分化腺癌15例,低分化腺癌36例.

1.2 免疫组化方法：抗生存素兔抗人多克隆抗体购自天津TD science公司,抗PCNA 鼠抗人单克隆抗体购自NUMAKER公司,S-P试剂盒及DAB显色剂试剂盒均购自福州迈新生物技术公司,即用型.常规SP染色方法按试剂盒说明书进行,一抗的工作浓度：生存素为1∶100,PCNA为1∶300,用PBS代替一抗为阴性对照,检测前均采用微波炉抗原修复处理.两者阳性反应为棕黄色颗粒,Survivin定位于胞质,免疫组化染色结果参考如下标准判定[1]：首先在低倍镜下（10×10）观察选择有代表性的区域,然后在高倍镜下（10×40）计数500～1000个肿瘤细胞,采用半定量积分法判断结果,阳性细胞数＜5％为0分,6％～25％为1分,26％～50％为2分,51％～75％为3分,＞75％为4分；阳性强度以多数细胞的呈色反应为准,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分.两分相乘,0分为阴性（-）,1～4分为弱阳性（+）,5～8分为中等阳性（++）,9～12分为强阳性（+++）.PCNA定位于胞核,染色结果参考文献[2]评分方法：以每张切片在400倍镜下均观察整体染况,每个区域计算200个细胞.阳性细胞数<5%为0,5%～35%为1分,35%～70%为2分,>70%为3分.着色强调计分：不着色为0分,弱着色（呈淡棕色）为1分,强着色（呈明显的棕黄色）为2分.阳性分级：以上两项相加,0分为（－）,2分为（±）,3分为（+）,4分为（++）,5分为（+++）,+～+++计为阳性,－～±计为阴性.

1.3 统计学方法：采用χ2检验、Spearman等级相关检验.

2.结果

2.1 生存素和PCNA的表达：生存素和PCNA蛋白在胃癌组织中阳性表达率分别为70.6%和80.4%, 非癌胃黏膜组织中阳性表达率分别为34.0%和57.4%,P<0.05.

2.2 生存素、PCNA表达与胃癌临床及病理特征的关系：胃癌组织中生存素蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关（χ2值分别为16.14、17.38、5.61,P<0.05）,而与病理类型、肿瘤大小无关（χ2值分别为1.29、3.29,P>0.05）.胃癌组织中PCNA蛋白表达在低分化腺组和淋巴结转移组明显高于高中分化腺癌组和无淋巴结转移组（χ2值分别为5.01、9.71,P<0.05）,但PCNA蛋白表达与临床分期、浸润深度、肿瘤大小无关（χ2值分别为0.16、0.02、0.23,P>0.05）.见表1.

2.4 生存素和PCNA表达的相关性:生存素阳性表达与PCNA密切相关,两者呈正相关（rs等于0.54,P<0.05）,见表2.

3.讨论

生存素基因定位于染色体17q25,是IAP家族中最小的成员,是迄今发现最强的凋亡抑制因子.与IAPs家族其他成员不同,它主要表达于胚胎和发育的胎儿组织,在成人终末分化组织(除了睾丸、胎盘和胸腺) 一般不表达,而在恶性肿瘤有高表达[3].生存素可特异性表达在G2/M期,调节细胞有丝分裂；通过抑制Caspase发挥抗凋亡作用[1,4].本研究结果显示, 生存素基因蛋白在胃癌组织中存在过表达,这种过表达可通过对抗G2/M期凋亡的诱导,克服凋亡的关卡,通过有丝分裂促进转化细胞的异常增殖导致胃癌的发生、发展.另有研究表明,生存素的表达与多种临床病理学指标密切相关[5].本实验亦发现,生存素基因蛋白的表达与胃癌淋巴结转移、TNM分期、浸润深度密切相关,而与病理类型、肿瘤大小无关,提示胃癌组织中生存素基因蛋白的表达可能成为提示患者预后较差的指标之一,对判断胃癌的恶性程度、病情进展及预后有一定的价值.

PCNA是与细胞增殖周期有关的周期蛋白,是一种分子质量为36 KU的酸性核蛋白,作为DNA多聚酶δ的辅助因子在DNA复制中起重要作用.其含量在静止期细胞极少, G1后期合成开始增加,S期达高峰, G2/M 期明显下降[6].因此,PCNA含量与细胞的增殖状态密切相关,可作为反映肿瘤细胞增殖程度和预后判断的指标[7].本研究中,PCNA在胃癌组织表达的阳性率明显高于非癌组织,在低分化腺癌和有淋巴结转移组高于高中分化腺癌和无淋巴结转移组,表明肿瘤分化越低, 增殖力越强, 恶性程度越高, 细胞生长越快,提示PCNA可作为判断胃癌恶性程度和生物学行为的另一个客观指标.

本实验还发现,在胃癌组织中,生存素蛋白表达阳性率与 PCNA 蛋白表达阳性率呈明显正相关,表明生存素异常表达与胃癌增殖活性升高有关,可能具有促进胃癌细胞增殖的作用.有关生存素促进细胞增殖的机制尚不清楚,胃癌中生存素是否通过竞争与CDK4/CyclinD1和CDK2/CyclinE结合形成复合体, 使得p16ink4a、p21从相应CDKs的复合体中释放出来,使CDK4 /CDK2激酶活性增强,癌细胞由G1→S期的机制来促进细胞增殖,有待进一步研究.